Reacția de polimerizare în lanț

Descriere

Reacția PCR este o metodă de amplificare enzimatică in vitro a unei anumite secvențe de ADN. Din punct de vedere chimic, reacția PCR este constituită din cicluri successive de replicare in vitro. Principalele componente ale reacției sunt: ADN matriță, o ADN polimerază termostabilă, primeri oligonucleotidici, deoxinucleotidtrifosfați (dNTP), tamponul de reacție și ioni de Mg2+ ​​​.

O reacție PCR este formată din n cicluri( între 25 și 40), în fiecare ciclu fiind parcurse 3 etape principale: denaturarea termică a matriței (desfacerea dublului helix ADN), atașarea primerilor și polimerizarea propriu-zisă. La terminarea unui ciclu de replicare in vitro (de amplificare), cantitatea de ADN rezultată este dublă față de matriță.

Numărul final de copii ADN este 2nxy, unde y = numărul inițial de copii, iar n= numărul de cicluri de replicare. În concluzie, reacția PCR este o metodă prin care se obțin cantități mari dintr-o anumită secvență ADN, molecule care pot fi ulterior manipulate sau analizate fără a fi necesară o prealabilă clonare moleculară a acestora.

Indicatii

  • Diagnosticul infecțiilor virale și bacteriene
  • Boli genetice
  • Neoplasme
  • Evaluarea prognosticului recurenței anumitor afecțiuni, în special maligne.

Interpretari

Tehnica este utilizata pentru detectia patogenilor bacterieni si virali (ex: HIV-1, Cytomegalovirus, Virusuri enterice, Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Mycobacterium tuberculosis, etc)

Un rezultat negativ înseamnă că agentul infecțios nu este detectat

Un rezultat pozitiv indică prezența ADN sau ARN patogen